Layton Kyouju to Eien no Utahime

Professor Layton und sein Lehrling Luke erhalten einen Anruf der Opernsängerin Jenis Quatlane, die sie bittet, zu ihrem Konzert zu kommen und bei einem Rätsel zu helfen. Ihr Freundin Melina war ein Jahr zuvor gestorben, ist aber als siebenjährige Mädchen wieder aufgetaucht und behauptet, das Geheimnis des ewigen Lebens entdeckt zu haben und Wissen zu besitzen, das nur das echte Melina haben könnte. Neugierig reisen Layton und Luke zum Opernhaus Crown Petone, während Remi in London bleibt, um verschwundene Mädchen zu untersuchen. Die Oper erzählt die Geschichte einer Königin im Reich der Unsterblichen, die krank wurde und starb, woraufhin ein Trank der Unsterblichkeit geschaffen wurde. Die Menschen des Reiches, die sehnsüchtig nach ihrer Königin zurückkehren wollten, tranken den Trank, um unsterblich zu werden. Die Geschichte endet damit, dass ein maskierter Mann das Publikum zu einem Spiel herausfordert, bei dem der Gewinner ewiges Leben erhält und alle anderen sterben. Layton und Luke müssen am Spiel teilnehmen, um die Wahrheit hinter dem ewigen Leben zu enthüllen. Die Ereignisse finden zwischen den Spielen *Professor Layton and the Last Specter* und *Professor Layton and the Miracle Mask* statt.