Layton Kyouju to Eien no Utahime

萊頓與他的學徒收到了來自歌劇演員 Jenis Quatlane 的請求，希望他們能出席她的演出並協助解決一個謎團。Jenis 的好友 Melina 一年前不幸去世，卻以七歲小女孩的身分突然出現，聲稱自己發現了永生的秘密，並擁有只有真正的 Melina 才會知道的知識。萊頓與 Luke 前往 Crown Petone 歌劇院調查此事，而 Remi 則留在倫敦追查失蹤女童的案件。這場歌劇講述了一位來自永生王國的女王因病去世後，人們為了重逢她而製造出永生藥水的故事。劇末，一位戴面具的男子向觀眾發起挑戰，勝者可獲得永生，其餘人則將面臨死亡。萊頓與 Luke 必須參與這場遊戲，才能揭開永生背後的真相。這段劇情發生在遊戲《Professor Layton and the Last Specter》與《Professor Layton and the Miracle Mask》之間。