Layton Kyouju to Eien no Utahime

Layton và đệ tử của ông nhận được lời mời từ ca sĩ opera Jenis Quatlane đến dự buổi biểu diễn và giúp điều tra một bí ẩn. Người bạn của Jenis, Melina, đã mất cách đây một năm nhưng bất ngờ xuất hiện trở lại dưới dạng một cô bé bảy tuổi, tuyên bố rằng mình đã khám phá ra bí mật của sự bất tử và sở hữu những kiến thức chỉ có Melina thật sự mới có. Tò mò trước sự việc, Layton và Luke đến nhà hát Crown Petone để điều tra, trong khi Remi ở lại London tìm hiểu về các trường hợp trẻ gái mất tích. Vở opera kể về một vị hoàng hậu trong Vương quốc Bất tử bị bệnh và qua đời, sau đó một loại thuốc bất tử được tạo ra. Người dân vương quốc, mong muốn đoàn tụ với hoàng hậu, đã uống thuốc để trở thành bất tử. Câu chuyện kết thúc bằng một người đàn ông đeo mặt nạ thách thức khán giả tham gia một trò chơi, hứa hẹn sự sống bất tử cho người chiến thắng và cái chết cho những người còn lại. Layton và Luke phải tham gia trò chơi để khám phá sự thật đằng sau sự bất tử. Sự kiện diễn ra giữa hai trò chơi *Professor Layton and the Last Specter* và *Professor Layton and the Miracle Mask*.