Layton Kyouju to Eien no Utahime

เลเยตันและลูกศิษย์ของเขาได้รับคำขอจากนักร้องโอเปร่าเจนิส คัวตแลนให้ไปร่วมชมการแสดงและช่วยไขปริศนา เมื่อนางพยศของเขา เมลินา ซึ่งเสียชีวิตไปเมื่อปีที่แล้วกลับปรากฏตัวอีกครั้งในรูปแบบเด็กหญิงวัยเจ็ดขวบ โดยอ้างว่าเธอค้นพบความลับแห่งชีวิตนิรันดร์ และมีความรู้เฉพาะที่เมลินาตัวจริงเท่านั้นที่จะมี เลเยตันและลุคจึงเดินทางไปยังโอเปร่าเฮาส์คราวน์เพโตน ในขณะที่เรมี่อยู่ที่ลอนดอนเพื่อสืบสวนเรื่องเด็กสาวที่หายตัวไป โอเปร่าเล่าเรื่องราวของราชินีในราชอาณาจักรอมตะที่ป่วยและเสียชีวิต หลังจากนั้นจึงมีการสร้างยาอมตะขึ้นมา ประชาชนของราชอาณาจักรที่ต้องการจะรวมตัวกับราชินีอีกครั้งจึงดื่มยาเพื่อให้กลายเป็นอมตะ เรื่องราวจบลงด้วยชายสวมหน้ากากที่ท้าทายผู้ชมให้เล่นเกม โดยเสนอชีวิตนิรันดร์ให้กับผู้ชนะ และความตายกับผู้แพ้ เลเยตันและลุคจึงต้องเข้าร่วมเกมเพื่อไขความจริงเบื้องหลังชีวิตนิรันดร์ เหตุการณ์นี้เกิดขึ้นระหว่างเกม *Professor Layton and the Last Specter* และ *Professor Layton and the Miracle Mask*