Layton Kyouju to Eien no Utahime

Nakatanggap sina Layton at ang kanyang apprentice ng isang kahilingan mula sa opera singer na si Jenis Quatlane na panoorin ang kanyang pagtatanghal at tulungan siya sa isang misteryo. Ang kaibigan niyang si Melina ay namatay isang taon na ang nakalipas ngunit muling lumitaw bilang isang pitong taong gulang na dalaga, na nagsasabing natuklasan niya ang sikreto ng walang hanggang buhay at nagtataglay ng mga impormasyong tanging ang tunay na Melina ang nakakaalam. Dahil interesado, pumunta sina Layton at Luke sa opera house ng Crown Petone, habang nanatili si Remi sa London upang imbestigahan ang mga nawawalang dalaga. Inilalahad ng opera ang kuwento ng isang reyna sa Kingdom of Immortals na nagkasakit at namatay, kung saan kalaunan ay nilikha ang isang inumin para sa imortalidad. Ang mga tao sa kaharian, na nananabik na muling makasama ang kanilang reyna, ay uminom ng inumin upang maging imortal. Nagtatapos ang kuwento sa isang lalaking nakamaskara na hinahamon ang manonood sa isang laro, na nag-aalok ng walang hanggang buhay sa mananalo at kamatayan sa mga matatalo. Kailangang sumali sina Layton at Luke upang malaman ang katotohanan sa likod ng walang hanggang buhay. Naganap ang mga pangyayari sa pagitan ng mga larong Professor Layton and the Last Specter at Professor Layton and the Miracle Mask.