Layton Kyouju to Eien no Utahime

Layton et son apprenti reçoivent une demande de la chanteuse d'opéra Jenis Quatlane de se rendre à sa représentation et de l'aider à résoudre un mystère. Son amie Melina, décédée un an plus tôt, est réapparue sous les traits d'une fillette de sept ans affirmant avoir découvert le secret de l'immortalité et détenant des connaissances que seule la véritable Melina pourrait posséder. Intrigués, Layton et Luke se rendent à l'opéra Crown Petone tandis que Rémi reste à Londres pour enquêter sur les disparitions de jeunes filles. L'opéra raconte l'histoire d'une reine du Royaume des Immortels qui tombe malade et meurt, après quoi une potion d'immortalité est créée. Les habitants du royaume, désireux de se réunir à leur reine, boivent la potion pour devenir immortels. L'histoire se termine par un homme masqué qui défie le public en lançant un jeu, offrant l'éternité au gagnant et la mort aux autres. Layton et Luke doivent participer pour percer le mystère de l'immortalité. Les événements se déroulent entre les jeux *Professor Layton and the Last Specter* et *Professor Layton and the Miracle Mask*.