Layton Kyouju to Eien no Utahime

लेटन और उनके शिष्य को ऑपेरा गायक जेनिस क्वाटलेन से उनकी प्रस्तुति में भाग लेने और एक रहस्य सुलझाने का अनुरोध प्राप्त होता है। एक साल पहले उनकी दोस्त मेलिना की मृत्यु हो गई थी, लेकिन वह सात साल की लड़की के रूप में वापस आई, जिसने दावा किया कि उसने शाश्वत जीवन का रहस्य खोज लिया है और उसके पास केवल असली मेलिना के पास होने वाली जानकारी है। उत्सुक होकर, लेटन और ल्यूक क्रॉन पेतोने ऑपेरा हाउस की ओर रवाना होते हैं, जबकि रेमी गायब हुई लड़कियों की जांच के लिए लंदन में रहती है। ऑपेरा में अमरता के राज्य की एक रानी की कहानी है, जो बीमार पड़कर मर गई, जिसके बाद अमरता की दवा बनाई गई। राज्य के लोग अपनी रानी से फिर से मिलने की लालसा में अमर बनने के लिए उस दवा को पी गए। कहानी एक मुखौटा पहने हुए आदमी के साथ दर्शकों को एक खेल में चुनौती देने और विजेता को शाश्वत जीवन तथा अन्य सभी को मृत्यु देने के साथ समाप्त होती है। शाश्वत जीवन के पीछे की सच्चाई का पता लगाने के लिए लेटन और ल्यूक को इसमें भाग लेना होगा। ये घटनाएं *Professor Layton and the Last Specter* और *Professor Layton and the Miracle Mask* के बीच होती हैं।